[의학,약학]생물학실험 - DNA 추출, PCR의 원리 및 실험
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작성일 21-09-16 14:13본문
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3. DNA polymerase 1 μl를 넣는다.
`實驗 재료`
-PCR
DNA polymerase, Template DNA, primers, dNTPs mixture, Reaction buffer, PCR tube, 증류수, pipette tip, pipette
`miniprep의 원리`
Plasmid DNA extraction
Plasmid를 분리해내는 방법은 추출량에 따라 miniprep, midiprep, maxiprep 이 있다아
기본적인 원리는 세균의 Cell wall을 Alkali lyssis method를 통해 깨부수고 DNA를 분리 한 후 다시 Chromosomal DNA와 plasmid DNA 중 plasmid만을 분리하는 것이다.
實驗에 사용한 용액의 역할을 알아보도록 하자.
Solution I
Solution II
Solution III
50mM Glucose
25mM Tris-Cl (pH 8.0)
10mM EDTA (pH 8.0)
(autoclave)
0.2N NaOH (10N을 만들어 만들때마다 stock 해서 씀)
1%SDS (Fresh ,37℃ 보관)
5M Potassium acetate 60ml
Glacial acetic acid 11.5ml
DDW 28.5ml (4℃에서 보관)
Cell wall 깨버…(투비컨티뉴드 )
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순서
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설명
다.
2. Template DNA 1 μl를 넣고 forward, reverse primer를 각각 0.5 μl 씩 넣는다.
4. 증류수 37 μl를 넣고 잘 pipetting 해 준다.
5. PCR machine의 well에 tube를 넣고 reaction 시킨다.실험결과/생물의학
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생물학實驗 - DNA 추출, PCR의 원리 및 實驗
`實驗 방법`
-DNA 추출
1. Solution 1
2. Solution 2
3. Solution 3
4. Washing
5. Elution
-PCR
1. PCR tube에 dNTPs buffer 4 μl와 reaction buffer 5 μl를 넣는다.